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免疫染色又失败这样的 bug 你经历过多少?自查表送上
免疫染色又失败这样的 bug 你经历过多少?自查表送上

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免疫染色又失败这样的 bug 你经历过多少?自查表送上
2024-03-22 22:46:35爱游戏电竞平台在线

  免疫染色虽然原理简单,但步骤复杂,经常忙活一整天,结果却不尽人意:切片出现脱片、染色结果为阴性、组织切片出现非特异性染色、染色背景过强、切片染色不均匀、拍照啥也看不见……

  但其实我们在进行问题原因排查时,按照样本制备、抗原修复、抗体检测、成像四步走,就可以排除大部分问题!按照下面的自查表来看看你的 IHC 结果不满意是不是因为没注意这些点吧!

  一抗二抗是否失活?一抗是否为同种型且适用 IHC 应用?抗体稀释度是否合适?二抗是否浓度过高或没办法提供足够的信号放大?

  一抗二抗是否有非特异结合?是否使用了同一物种的抗体?是否有多克隆抗体或者抗体浓度导致的非特异结合?

  物镜是否干净?图像是不是真的存在光学像差?样品中是否有发射光谱重叠?封闭剂和色原与盖玻片是否兼容?

  不难看出,在 IHC 实验中选对抗体实验就成功了一半!除去 IHC,还有一系列实验中抗体是影响成败的关键因素!

  默克 ZooMAb® 重组定制抗体,凭借 B 细胞永生化技术专利,成功率极大的提升!识别二维码有机会获得ZooMAb® 抗体免费试用机会!先到先得!

  原因要追溯到传统抗体生产技术的原理,抗体储存条件不当或者抗体靶标复杂异常都可能会导致抗体的特异性差,但抗体结合特性同样受到生产和纯化工艺相关的许多因素制约。想知道有哪一些原因导致抗体不稳定,需要先了解各类抗体的生产的全部过程和作用模式。

  多克隆抗体直接从通过免疫动物后的血清中产生和分离,流程相对简单,速度快且成本低。多抗可以识别抗原的多个表位,灵敏度更高。多抗无表位被掩盖的顾虑,在检测翻译后修饰或结构异质化蛋白时具有一定优势。

  大多数多抗产自于兔子体内,是因为兔物种对抗原的免疫反应较强。然而,多抗有时会引入较高的背景信号,不同制备批次间易存在一定的差异,导致实验结果不可重复。

  杂交瘤技术将宿主免疫产生的 B 细胞与永生骨髓瘤细胞融合,筛选获得的杂交瘤细胞能够在培养中持续生长,表达对抗原单一表位具有特异性的抗体,并在一段时间内保持抗体的稳定性能。适合于特定结构域或特定修饰的特异性检测

  大多数单抗产自于小鼠体内,是因为小鼠物种免疫的特异性较强。然而杂交瘤细胞系在经过长期培养后,也许会出现细胞系漂移或返祖现象,不分泌特异抗体或者抗体效价降低。

  既然兔多抗和鼠单抗各有各的优点,有没有一种抗体可以集合二者优点,又摒弃二者的缺点呢?我们全都要!

  通过基因克隆技术,将携带抗体基因序列的载体引入表达宿主(如细菌、酵母或哺乳动物)中,用来生产高质量的功能性抗体。

  重组抗体稳定性很高,就没有批间差异,并且生产的全部过程不需要动物,既避免动物病原体污染,也减少了对动物的伤害。

  重组抗体技术平台,ZooMAb® 重组单克隆抗体平台,荣获 2020 年度 CiteAb 创新产品奖

  ZooMAb® 重组抗体平台基于独有的专利技术,从免疫宿主的外周血单核细胞中分离大量 B 细胞并永生化,效率可达 80~90%,因此能获得大量阳性克隆,并赢得足够的时间来进行筛选与鉴定,获得兼具高灵敏度、高特异性、高批间稳定性的优质抗体。

  ZooMAb® 抗体经过浓度预校准,每支抗体的浓度相同,确保实验方案的稳定性。ZooMAb® 抗体以冻干粉形式提供,可在环境和温度下进行运输,不需要干冰和低温冰箱。冻干粉抗体储存于 1.6 ml 管中,管盖包含防蒸汽的 O 形环,密封效果好,可长期稳定保存。

  通过多重筛选获得高亲和力、高特异性的克隆,同时每种抗体至少经过 3 种以上常见应用验证,如 WB,IHC,IF,ELSIA 等,一支优质抗体解决多种应用需求。

  ZooMAb® 抗体利用重组表达技术生产,生产所带来的成本相较免疫动物纯化抗体低,且产量稳定可靠。是市面上性价比相对高的抗体生产平台。